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Biochimie préparative

 

Présentation

Le pôle de biochimie préparative permet l’obtention de protéines pures et homogènes que ce soit dans le but d’une étude fonctionnelle ou d’une étude structurale. Les équipements et méthodologies disponibles permettent d’obtenir de grandes quantités de protéines pures (de l’ordre de la dizaine de mg). Les expériences peuvent être réalisées par la plate-forme ou par l’utilisateur lui-même. Le pôle offre aussi un service de synthèse peptidique grâce à un synthétiseur Liberty One CEM.

Citation de la SFR Biosciences sur les publications

Activités

  1. Différents niveaux de prestations sont proposées :
  • Prise en charge par la plateforme d’un projet de production de protéines (à partir du gène ou du plasmide recombinant) : clonage en plasmide d’expression, contrôle expression et solubilité, expression en système bactérien (et système baculovirus et cellules de mammifères en collaboration avec le plateau AniRA-AGC), purification par chromatographie ou autre, dosages et contrôle qualité sur des équipements biophysiques de dichroïsme circulaire et DLS.
  • Purification d’anticorps à partir de sérums ou surnageants de culture cellulaire
  • Mise à disposition des équipements de biochimie / biophysique : Formation à l’utilisation des équipements, mise à disposition des consommables.
  • Synthèse peptidique : jusqu’à 60 résidus avec un large choix d’échelle allant de 0,05 à 5mmoles, avec différentes modifications post-traductionnelles (biotinylation, chromophore, marquage 13C et ou 15N, cyclisation, …). Dans le cas de petites protéines, la synthèse peptidique peut être une alternative pour la production d’une dizaine de mg, à moindre coût.
  1.  

Equipements

  • 3 Systèmes de purification de protéines FPLC : AKTA PURE, AKTA Purifier (GE Healthcare), NGC (BioRad) (dont 2 contenus dans une armoire froide Sanyo).
  • 1 Robot BioSprint 15 (Qiagen) : mini purification de protéines sur billes magnétiques pour tests d’expression, de solubilité, et de purification (15 tests en parallèle possibles).
  • 1 Typhoon fluo-phosphoimager GE Healthcare : scanner laser multi-usages, qui permet la détection et la quantification très précise d’échantillons de protéines, d’ADN, d’ARN, ou de molécules marquées par fluorescence ou radioactivité.
  • 1 Caméra CCD Fusion Fx Vilber Lourmat : permet de photographier des gels, des blots et d’autres supports de révélation.
  • Incubateurs Multitron Infors : agitateurs à température variable 10-40°C.
  • 1 Nanodrop pour les dosages de protéines et acides nucléiques
  • 1 Synthétiseur de peptides en phase solide, Liberty One (CEM) avec chaine de chromatographie liquide HP1100 (Agilent).
  • 1 appareil de DLS Diffusion Light Scattering Malvern NanoS, permettant des contrôles d’homogénéité de la protéine purifiée.
  • 1 spectromètre de dichroïsme circulaire Chirascan (Applied Photophysics) pour les analyses de repliement des protéines.

 

Formation

 

  1. La formation sur les équipements de biochimie préparative est gratuite mais obligatoire. Une validation est nécessaire avant toute utilisation en libre-accès.

Tarifs

  1. Tarifs accessibles en intranet (équipes contributrices et équipes académiques) ou sur demande spécifique.

 

Documentation

 

Liens

  1. Réservation des équipements de biochime préparative (pour les utilisateurs déclarés – accès sécurisé)
  2. Comment accéder aux plateaux - entrée de sites (en intranet)

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