Vous êtes ici : Accueil / Actualités / Formations / Formations de la SFR Biosciences / Formation PCR Quantitative

Formation PCR Quantitative

Objectifs pédagogiques

  • Présenter tous les paramètres des cinétiques d’amplification et de dissociation et de souligner leur importance dans les calculs de quantification
  • Souligner l’impact du choix des amorces sur les résultats
  • Rendre le design des amorces accessible
  • Trouver une bonne stratégie pour gagner beaucoup de temps et d'efficacité
  • Comprendre l’importance de la rigueur extrême nécessaire dans cette technique à chaque étape afin d'obtenir reproductibilité et fiabilité des résultats


 

Programme

  • Analyse de la courbe de dissociation (Melting Curve Analysis), Etude de la cinétique d’amplification, Efficacité de la PCR
  • Quantification par PCR en temps réel
  • Stratégie de normalisation
  • Les Résultats
  • Publication et PCRQ : les MIQE
  • Validation des microarray et PCRQ haut débit
  • Différentes approches du génotypage ou polymorphisme en PCRQ
  • Dessin des amorces de PCRQ
  • Précautions et risques biologiques
  • Mise en place d’un projet de quantification : les points à considérer
  • Les équipements : thermocycleurs, circuit PCR, Nanodrop, bio analyseur
  • Les consommables
  • Les kits
  • Protocoles et optimisation
  • Echantillons, ARN, cDNA, ADN : nature, qualité, extraction, quantification, conservation
  • La reverse transcription : Une étape clé à optimiser en permanence
  • Le cDNA
  • Détecter les inhibitions de la PCR
  • Les amorces
  • La gamme d’étalonnage
  • Les contaminations et cross contaminations
  • Programmation des runs
  • Présentation du logiciel du StepOne Plus
  • Analyse des runs – Savoir identifier les erreurs
  • Le piège des (mauvais) algorithmes de détection du seuil
  • Calcul et exploitation des résultats dans Excel
  • Présentation d’outils gratuits pour les calculs ou la normalisation : REST, Bestkeeper
  • Présentation d’outils bio-informatiques pour le design des amorces : HUGO, ENSEMBL, BLAST, UPL, Primer blast, Amplify etc.
  • Bibliographie

 

Public et pré-requis

Personnels scientifiques et techniques

 

Contact

bariza.blanquier@inserm.fr

 

Dates et lieu des prochaines sessions

Du 12 au 14 octobre 2015 - organisé avec Fc3Bio
Du 20 au 22 juin 2016 - organisé avec Fc3Bio
Du 10 au 12 octobre 2016 - organisé avec Fc3Bio

 

Supports de formation

Mots-clés associés :