PRÉSENTATION

Le pôle de biochimie préparative permet l’obtention de protéines pures et homogènes que ce soit dans le but d’une étude fonctionnelle ou d’une étude structurale. L’expression des protéines recombinantes est réalisée en système bactérien uniquement. Les étapes de purification se font ensuite par chromatographie, et différentes contrôles qualité finalisent la production. Les expériences peuvent être réalisées par la plate-forme ou par l’utilisateur lui-même.

Le pôle offre aussi un service de synthèse peptidique et un service d’immunoessai automatisé sur système JESS.

PRESTATIONS

Différents niveaux de prestations sont proposés : prestations de services ou mise à disposition d’équipements après formation

1. Prise en charge par la plateforme d’un projet de production de protéine

A partir du plasmide recombinant, contrôle expression et solubilité, expression en système bactérien, purification par chromatographie ou autre, dosages et contrôle qualité par TSA, NanoDSF ou sur des équipements biophysiques de dichroïsme circulaire, SEC-MALS et DLS

2. Service de Synthèse peptidique

Synthèse jusqu’à 70 résidus avec un large choix d’échelle allant de 0,05 à 5mmoles, avec différentes modifications post-traductionnelles (biotinylation, chromophore, marquage 13C et ou 15N, cyclisation, …). Dans le cas de petites protéines, la synthèse peptidique peut être une alternative pour la production d’une dizaine de mg, à moindre coût.

3. Service d’immunoessai sur JESS

Un immunoessai sensible, reproductible et quantitatif en 3h ! Il s’agit d’un système de migration en capillaires (cartouches de 25 capillaires) pour une séparation selon 3 gammes (2-40 kDa, 12-230 kDa, ou 66-440 kDa) avec révélation en chemiluminescence ou en fluorescence. Possibilité de quantification, de multiplexage dans le même capillaire. La sensibilité est bien meilleure qu’en western blot classique (3 µg de protéines). Plus de 3000 anticorps primaires sont validés par le système, permettant de les utiliser dans les conditions optimales.

4. Mise à disposition des équipements de biochimie 

Formation obligatoire à l’utilisation des équipements, mise à disposition des consommables. Une validation est nécessaire avant toute utilisation en libre-accès.

ÉQUIPEMENTS

2 AKTAs PURE (Cytiva) 1 robot BioSprint 15 (Qiagen) : mini purification de protéines sur billes magnétiques pour tests d’expression, de solubilité, et de purification (15 tests possibles en parallèle) 1 Caméra CCD Fusion Fx (Vilber Lourmat) : permet de photographier des gels, des blots et d’autres supports de révélation 1 Nanodrop pour les dosages de protéines et acides nucléiques 2 Incubateurs Multitron (Infors)
1 Typhoon fluo-phosphoimager (Cytiva) : scanner laser multi-usages, qui permet la détection et la quantification très précise d’échantillons de protéines, d’ADN, d’ARN, ou de molécules marquées par fluorescence ou radioactivité.
Liberty One (CEM) avec 2 chaines de chromatographie liquide HP1100 (Agilent) et Ultimate (ThermoScientific)
Le JESS (ProteinSimple – Biotechne)