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AniRA Vectorologie

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Présentation

 

Le plateau AniRA-Vectorologie offre un savoir-faire technologique dans le domaine de la production de vecteurs lentiviraux destinés au transfert stable et efficace de séquences nucléiques  (gène, ADNc, Sh/miARN) dans des lignées cellulaires, des cellules primaires difficilement transfectables (cellules souches, …) ou chez un organisme entier.  Ce système de transfert est utilisé dans de nombreux domaines de la recherche fondamentale ou clinique. Les applications sont multiples et l’utilisation de ces vecteurs s’est progressivement étendue aux champs de la thérapie génique, de l’immunothérapie, de la vaccinologie, de la transgénèse et de la virologie.

AniRA-Vectorologie est intégrée dans la plateforme régionale AniRA labélisée IBiSA, membre de l’Infrastructure de Recherche nationale Celphedia.

La plateforme de vectorologie offre une expertise, la production de lots de vecteurs rétro et lentiviraux bien caractérisés et prêts à l’emploi en confinement C2, réalisée dans le respect strict des conditions de biosécurité édictées par le Haut Conseil des Biotechnologies (confinement L2 ou L3 pour la production) selon une chartre d'utilisation des services propre à la plateforme de vectorologie. La principale activité de la plateforme de vectorologie est la production de vecteurs sur la base de MLV, HIV-1 ou SIV.

Plus spécifiquement :

  • Un conseil dans le choix des vecteurs, pour le clonage de gènes d’intérêt et pour le niveau de biosécurité des vecteurs.
  • La production de vecteurs pour la surexpression de gènes endogènes ou l’expression ectopique d’un gène dans une lignée cellulaire.
  • La production de vecteurs pour le KO de gènes par des vecteurs codant des shRNAs dirigés contre l’ARN du gène d’intérêt.
  • La production de vecteurs de régulation d’expression de gènes ou conditionnant le KO de l’expression de gènes par des lentivecteurs inductibles.
  • La production de vecteurs de niveaux de confinement C2 ou C3, ainsi que la titration basée sur l’expression d’une protéine rapportrice, par sélection avec un antibiotique et par Q-PCR.
  • La formation en production de vecteurs sur demande individuelle et à titre exceptionnel.
  • Un service de lentigenèse: le plateau est impliqué dans le service de transgenèse lentivirale afin de générer des souris transgéniques.

Plus de précision sur la transgenèse lentivirale 

Citation de la SFR Biosciences sur les publications

Activités

 

  • Production de lots de vecteurs rétroviraux (MLV, HIV-1 et SIV) en confinement L2 ou L3 :
  1. La production des  vecteurs lentiviraux est réalisée par tri-transfection en suivant la méthode de transfection au phosphate de calcium, dans une lignée de cellules embryonnaires de rein (293T). Les trois plasmides utilisés codent respectivement pour:
  2. - La glycoprotéine d’enveloppe du virus de la stomatite vésiculaire (VSVG).
  3. - Les protéines de structures et enzymatiques du virus (gag+pol).
  4. - Le vecteur viral codant pour un gène rapporteur (GFP).

shéma production d'un vecteur lentiviral.

  • Concentration de virions
  • Titration de particules virales infectieuses :

Par infection de cellules HEK293T suivie d'une des révélation suivante :

- Détection par cytométrie en flux (FACS), du vecteur grâce à un gène rapporteur codant pour un fluorochrome (GFP, mRFP, mKate,…),

- Sélection avec un antibiotique  (puro, néo, zéo,…) grâce à un gène de résistance orésent dans le vecteur.

- Quantification du nombre de copies de génome intégré par QPCR (si les séquences rétrovirales sont compatibles avec nos conditions).

  1.  

Nous proposons aussi une quantification des particules physiques par dosage de la protéine de capside p24/p27/p30 en test ELISA.

Voir la technique

Description détaillée des modalités de production, validation et livraison des vecteurs

Pour toute demande de production de vecteurs, le demandeur doit remplir une demande et signer la « Charte d’utilisation des services de la Plateforme de Vectorologie »:

 

Aucune demande de production ne sera prise en compte sans :   

  1. - Le Formulaire de demande (entièrement rempli sous format Word) envoyé par mail.
  2. - La description du vecteur avec sa carte détaillée (en version électronique pour soumission au HCB) avec le nom du gène formellement identifiable dans une base de données.
  3.  - Le numéro d’agrément OGM / HCB.
  4.  

Equipements

 

 

Contact/Localisation

Comment accéder aux plateaux - entrée de sites (en intranet)

La plateforme est hébergée par le CIRI (Centre International de Recherche en Infectiologie) U1111/UMR5308  Inserm-CNRS-UCBL - ENS de Lyon dans l'équipe EVIR située au rez de chaussée du M7 (ex LR5) de l'ENS de Lyon Site Monod :

  1. Bat. LR5 - Equipe: EVIR
  2. Ecole Normale Supérieure de Lyon
  3. 9 rue du Vercors
  4. 69007 Lyon

Pour tout renseignement, contactez :

  1. Caroline Costa Fejoz: responsable plateau
  2. Tel : 04 72 72 87 28
  3. Mail : caroline.costa@ens-lyon.fr
  4. Pour toute demande de production de vecteurs, merci de  télécharger le fichier de demande de productions, le compléter et renvoyer au contact suivant : plateau.vectorologie@ens-lyon.fr

 

Formation

  1. Production de vecteurs rétroviraux: théorie, pratique et biosécurité (sur demande individuelle et à titre exceptionnel).

 

Tarifs

  1. Tarifs accessibles en intranet (équipes contributrices et équipes académiques) ou sur demande spécifique.

 

Documentation

  1. Fichier de demande de production de vecteur

 

Liens

  1. Guide 'O.G.M. en milieu confiné'
  2. Guide Haut Conseil aux Biotechnologies
  3. Un guide des risques biologiques (CNRS)

 

 

 

 

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